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各种细胞免疫检测方法比较

作者:admin 信息来源:达科为 日期:20120523 打印 字体:  
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类型 检测名称 检测方法 主要特点
体内功能检验 迟发型超敏反应法 皮下注射抗原或者负载抗原的DC,观察红斑、硬块的发生与大小 优点:体内功能性检验,相对比较容易操作; 
缺点:只是一种初筛,加阳性与假阴性比较严重。
体外表型检测 TCR可变区分析法 使用针对T细胞受体(TCR)可变区的流式抗体来对表达特定可变区的T细胞计数 优点:可以提供关于可变区使用的群体分布; 
缺点:识别同一种抗原的TCR的可变区可能不相同;单抗不够丰富,不能检测所有种类的可变区。
多肽MHC四聚体法(Tetramer) 用荧光标记的MHC-肽四聚体去结合T细胞,进而做流式分析 优点:能做精细分析,灵敏较高; 
缺点:只能分析MHC-I类分子,四聚体制备复杂,成本高昂,需要预先合成T细胞表位肽。
TCR CDR3序列分析 用PCR的方法扩增T细胞受体互补决定区3的序列,测序 特点:简单灵敏,但还不能用于群体分析; 
该方法目前刚刚开展,还不能全面评价。
体外功能检测 细胞因子ELISPOT法 抗原与待测PBMC混合,通过ELISPOT检测阳性细胞频率 优点:灵敏度最高,单细胞水平,特异性强,结果直观可信,成本低,高通量; 
缺点:血液PBMC的分离还未实现自动化;还有待于发展双因子、多因子ELISPOT技术。
淋巴细胞增殖试验(3H胸苷掺入法) 待测PBMC、辐射过的APC、抗原混合孵育,特异性的T细胞增殖,通过掺入的3H胸苷来确定增殖水平 优点:是传统方法,研究比较透彻; 
缺点:需要放射性操作,非特异性反应比较强,并且灵敏度低。
细胞内细胞因子染色法 抗原与待测PBMC混合,把细胞因子保留在细胞内,然后用流式抗体染色、计数 优点:单细胞水平,可以同时检测多个参数、多种因子; 
缺点:操作复杂,灵敏度相对较低,容易出现假阳性。
细胞因子ELISA法 抗原与待测PBMC混合,然后用定量ELISA法测量细胞受刺激而分泌到上清液中的细胞因子浓度 优点:特异性强,可以对细胞因子浓度定量,有以全血作为检测样品的潜力; 
缺点:只能做群体水平检测,灵敏度不够高。
细胞因子mRNA定量法 通过定量RT-PCR方法检测受刺激的细胞中细胞因子mRNA的水平 优点:有利用各种组织样品的潜力,灵敏度高,高通量; 
缺点:容易出现假阳性,只能做群体水平检测。
CTL杀伤法(51Cr释放法) 制备51Cr标记的表达抗原的靶细胞,与待测PBMC混合,通过51Cr释放来确定靶细胞被杀伤的水平 优点:最直接的功能性检测; 
缺点:靶细胞制备困难,试验周期长,需要放射性操作,灵敏度低。
极限稀释计数CTL法 待测PBMC稀释到一系列孔中,体外增殖,然后加入靶细胞判定每孔裂解的阴阳性,最后通过泊松统计法确定CTL极限稀释倍数 优点:对CTL的频率计数比直接CTL杀伤法更准确,灵敏度也有所提高; 
缺点:实验及其复杂,工作量极大,并且因为有些CTL前体细胞不能增值而导致结果偏低。
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