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Polyplus转染常见问题 — DNA转染:jetPRIME® & jetPEI®

作者:admin 信息来源:达科为 日期:20171225 打印 字体:  
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适合瞬时基因表达的产品是哪个?

jetPRIME® 是推荐用于血清存在条件下,贴壁细胞的常规转染试剂。它非常适合DNA的转染、几个质粒的共转、DNA/siRNA的共转,并且对细胞非常温和,因为转染时只需少量的试剂和核酸。

jetPEI® 转染试剂特别适用于自动或手动高通量筛选(HTS),可提供三种Protocol:反向、批量、正向。jetPEI® 提供高重复性结果,并且DNA/ jetPEI®复合物能稳定存在长达4小时。


如何使用jetPRIME® 进行多个质粒DNA共转?

对于多个质粒共转,推荐每孔的总DNA用量不超过jetPRIME® 说明书上指定的大DNA用量。每种质粒的使用比例根据质粒的大小、结构和预期的表达水平而定。每种质粒用量应至少占每孔总DNA用量的10%。


如何进行质粒DNA和siRNA的共转?质粒DNA和单链寡核苷酸的共转?

对于质粒DNA/siRNA的共转,我们推荐使用jetPRIME® 试剂。请参阅jetPRIME页面上提供的DNA和siRNA共转的标准protocol:http://www.polyplus-transfection.com/products/jetprime/

对于DNA/ssODN(单链寡核苷酸)的共转,可以应用相同的protocol。


难转细胞如何进行转染?

一些悬浮细胞和原代细胞比如淋巴细胞、成纤维细胞、神经元,很难用化学试剂进行转染,因此对于这类细胞通常推荐电转或病毒转。

除了用这些方法转染难转细胞,Polyplus-transfection开发了一种基于聚合物的转染试剂jetMESSENGER™ 。它用于mRNA的转染,并在各种难转细胞如淋巴细胞、神经元和多种原代细胞中显示出高转染效率。相比DNA转染,mRNA转染获得更高的转染效率,转染后蛋白表达更快,与质粒或病毒载体的转染相比,无插入突变的风险。


DNA/jetPRIME® 复合物能稳定存在多长时间?

使用jetPRIME® 为了获得更好的转染效率,推荐复合物孵育时间不要超过十分钟。因此,对于需要更长孵育时间的高通量筛选应用,推荐使用jetPEI®,因为jetPEI®/DNA复合物可稳定存在长达4小时。


使用jetPRIME进行DNA转染,存在质粒大小的限制吗?

使用jetPRIME® 进行DNA转染,没有质粒大小的限制。但是,请记住对于同样DNA量,大质粒的基因拷贝数低于小质粒。


使用jetPRIME进行质粒转染的机制是什么?

jetPRIME®DNA相互作用形成阳离子复合物,通过内吞作用进入细胞。核内体通过质子海绵机制在细胞质基质中释放出DNA (Behr, Chimia 1997)。质粒大多数在有丝分裂期间,核膜消失时进入细胞核。由于这个原因,原代细胞或细胞分裂慢的细胞系通常很难转染。

更多转染机制的信息,请参考:http://www.polyplus-transfection.com/technologies/what-is-transfection/

 

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