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Stemcell分选相关产品FAQ

作者:admin 信息来源:达科为 日期:20141204 打印 字体:  
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一、Easysep 产品是如何工作的? 


Q:Easysep产品能够用于正选或者是负选实验吗?


A:是的。Easysep试剂盒能够用于去除不需要的细胞的负选或者是富集想要的细胞的正选方法。清除试剂盒是能够用于移除特定标记的细胞(比如:GlyA)。


Q:Easysep分选的原理是什么?


A: 使用抗体复合物和葡聚糖包被的纳米磁珠可在短时间内分选细胞。四聚体抗体复合物( Tetrameric  Antibody  Complexes, TAC )可将目标细胞和磁珠联结起来。当样本置于EasySep™磁极内时,标记的细胞会被吸附到试管壁上。被磁珠标记的细胞(正选组分)仍将保留在试管中,而未经标记的细胞(负选组分)则被倒入新的试管中。


Q:我需要使用哪一种规格的分离柱?


A:  EasySep™ 产品不需要使用分选柱子。快捷的无柱分选!


Q: 如何分析收集到的样本细胞的纯度?


A: 每个EasySep™试剂盒里都提供了详细的产品说明书,并且包括了详细的流式分析的纯度检测结果。


Q:EasySep™分选是否能够自动化?


A: 是的。RoboSep™系列是能够完全实现细胞的自动化分选,自动进行EasySep™细胞标记以及分选的全过程。


Q: 样本初始细胞较少时能够使用EasySep™进行分选吗?


A: 可以,我们推荐使用细胞浓度2X108 cells/ml,最小体积为100 ul。即100 ul溶液中包含2X107个细胞。


二、EASYSEP™ 磁珠相关


Q: EasySep™磁珠与流式仪器是否兼容?


A: EasySep™磁珠能够与流式仪器兼容,因为EasySep™磁珠的大小是纳米级别的,约比正常的商业用途上用于无柱分选系统中的磁珠还小5000倍。


Q: 使用EasySep™磁珠用于富集细胞时,是否能够将磁珠与细胞进行解离?


A: 不需要进行解离,因为EasySep™的磁珠是很小的,它并不影响细胞下游的应用。


Q: EasySep™磁珠结合影响细胞吗?正选的细胞结合磁珠是否会有功能学的影响?


A: 已经有大量的文献报道,使用EasySep™正选的试剂盒分离的细胞能够用于功能学的研究(细胞培养等)。我们也经过验证正选后与EasySep™的磁珠结合的细胞并不影响细胞的功能的改变。


如果担心细胞结合磁珠会影响实验结果,我们建议可以使用负选的方法进行细胞的分选。EasySep™磁珠负选的方法能够分选出纯度较高的未结合磁珠的细胞,或者使用RosstteSepTM能够从全血中分离未结合的细胞,而不涉及到磁珠问题。


三、EASYSEP™ 实验过程是可以改变的吗?


Q: 我能够改变细胞在磁极中吸附的时间吗?


A:可以的。但是,这样很有可能会影响试剂盒分选的最佳结果。试剂盒里提供的操作步骤是已经优化的最佳条件,可以保证分离后细胞的纯度、得率以及完成实验时所需的最短的时间。


Q:正选的时候,可以进行3次的磁珠吸附的过程吗 ?


A: 可以的,进行多次的磁珠吸附可以提高细胞的纯度,但是有可能会导致细胞的得率降低。


四、RosetteSepTM 产品是如何工作的? 


Q: 什么是RosetteSep?


A: RosetteSep™是可以直接从人全血中快速分离纯化的细胞,而不需要特定的分离柱和磁极。


Q:ROSETTESEP™分离的原理是什么?


A:从全血中分离免疫细胞,只需使用适当的RosetteSep™抗体混合物与样品孵育,然后使用SepMate™或标准密度梯度离心进行分离。RosetteSep™将不需要的细胞与红血细胞交联,形成免疫玫瑰花结结构,在离心过程中,这些免疫玫瑰花结会被离心到管底而被除去(图1)。

 

图1. 加入RosetteSep™抗体混合物后,进行密度梯度离心前的血液样本图例


在血浆和密度梯度离心液之间的界面中留下高纯度的目的细胞。如果使用SepMate™,只需将纯化的细胞倒入新的试管即可。若用密度梯度分离液,需要从血浆和密度梯度离心液的界面收获目的细胞。


Q:细胞收集的影响因素是什么?


A: 所使用的实验材料的温度会影响细胞的收集。所有的使用材料在进行分离前都必须平衡至室温(包括样本,密度离心介质,PBS,离心机等)。分离层也会影响细胞的收集,要小心地将样本铺在密度离心介质上层,尽量不要打破分离层。确定收集到的细胞没有包含红细胞,若收集到少量的密度离心介质是没有关系的。


Q:哪些细胞样本可以用于RosetteSep™?


A: RosetteSep™可以用于人白细胞去除、骨髓或者是白膜层的收集,细胞的密度不要超过5X107 cells/ml(必要的话可以进行稀释);有核的细胞与红细胞的比率约为1:20,所以必要的时候可以先对红细胞进行裂解。


Q: RosetteSep™是否可以用于冻存的细胞或者培养的细胞分离?


A:可以的。细胞可以用包含2%FBS的PBS重悬,细胞的密度为2-5x107 cells/ml。


Q: RosetteSep™是否可以用于冻存过的全血的细胞分离?


A:可以的,有时候冻存过的全血包含着未成熟的有核的红细胞,这种细胞比成熟的红细胞具有更低的密度,但是未成熟的红细胞并不会通过Ficoll™而分离,从而导致更高的RBC污染,相比外周血分选。


Q: RosetteSep™是否可以用于小鼠细胞的分离?


A: 不可以,但是我们有其他的产品如EasySep™系列,基于磁珠连接细胞的原理的产品能够用于小鼠或者是其他非人源细胞的分离。


五、样本的抗凝处理相关


Q: RosetteSep™需要使用什么抗凝剂?


A: 人的外周血必须使用肝素化的抗凝管进行收集;冻存的血液必须使用ACD。


Q:使用RosetteSep™前需要将抗凝剂清洗掉吗?


A:不需要,抗体的混合物可以直接加入到样本细胞溶液中。

 

 

 

 

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