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融合蛋白标签的“利器”——TEV蛋白酶

作者:admin 信息来源:达科为 日期:20190614 打印 字体:  
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昨天,小达君为大家带来了抗体纯化用IBA新品—Protein A Agarose,今天我们继续来说说蛋白表达纯化那点事儿。

通常,我们会利用融合标签与目的蛋白的融合表达实现某些实验目的,例如,蛋白纯化(Strep-tag、His)、增强蛋白的可溶性(MBP、GST)、增加蛋白的表达量(Flag、GST)、报告目的蛋白表达情况(GFP)等。但是,当融合标签完成了它的使命,又会影响下游的某些实验时,例如免疫动物、影响目的蛋白活性,我们就需要考虑如何将其去除。小达君为您推荐一款去除融合标签的利器——Lucigen的SelecTEV™ Protease,简单的实验操作即可得到较纯的目的蛋白。

SelecTEV™蛋白酶是一种基因工程改造的烟草蚀刻病毒(TEV)蛋白酶,通过His标签的亲和层析从大肠杆菌中纯化,SDS-PAGE分析表明其纯度为90%。SelecTEV™蛋白酶能够识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly七个氨基酸以及与其密切相关的序列,并在Gln和Gly残基之间进行切割。 这七种氨基酸序列在蛋白质中很少见,使得SelecTEV™蛋白酶成为从融合蛋白中去除标签的理想选择。利用蛋白酶N-末端的His标签通过亲和层析即可从酶切反应中除去SelecTEV™蛋白酶。

产品特点:

  • 经过基因工程改造,与天然蛋白酶相比具有更高的特异性,活性和稳定性;

  • 带有His标签(六个组氨酸),更易于去除;

  • 1unit SelecTEV™蛋白酶在30°C下、1h内可以切割≥85%的3μg对照底物;

  • SelecTEV™蛋白酶最佳切割温度30°C,但在很宽的温度(4 - 30°C)和pH(6.0 - 8.5)范围内有效,以适应您的特定蛋白质。

实验流程如下:

酶切反应完成后,用标签特异性纯化柱去除融合标签,收集流穿液。为去除流穿液中的TEV蛋白酶,利用镍柱进行二次纯化,得到的流穿液中的蛋白即为纯的目的蛋白。

产品信息:

产品名称

货号

规格

品牌

目录价

SelecTEV™ Protease

30810-1

1,000 U

Lucigen

1,834

30810-2

5,000 U

Lucigen

8,008


Lucigen公司成立于1998年,提供各类用于分子生物学研究相关产品,可以使研究者成功克隆较难克隆的基因。2016年Lucigen收购了Illumina旗下Epicentre产品线,2018年又被英国LGC公司收购。目前产品线主要包括:体外转录、基因克隆(BAC克隆试剂盒)、感受态细胞(TG1噬菌体文库构建感受态)、体外扩增、转座子突变、蛋白表达、核酸提取等。

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