大鼠常见免疫细胞的流式鉴定

大鼠模型是生物医学研究中重要的资源，因与人类免疫系统相似，而常被用于免疫相关的功能研究。然而目前小鼠模型在基础和机制免疫学研究中占主导地位，相对缺乏对大鼠模型中免疫细胞的流式分析鉴定。本文将分享对大鼠常见免疫细胞的流式鉴定方案，鉴定分析不同组织中的粒细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞及NK细胞。

实验方案1

该方案以10-12周龄Lewis大鼠的肌肉、脾脏、胸腺和肠系膜淋巴结为样本，组织经消化并用40μm细胞过滤器过滤后制备成单细胞悬液。

配色Pannel：

圈门逻辑：

圈门分析：

1. 侧向散射(SSC)和前向散射(FSC)参数对样本细胞进行圈门，利用FSC-H去除粘连细胞，然后进行单一细胞圈门；采用死活染料及CD45对活性良好的CD45+细胞进行下游分析；

2. 巨噬细胞：根据CD11B、CD68圈出巨噬细胞（CD11B⁺CD68⁺），再根据CD86和CD163分别圈出M1（CD86+）和M2（CD163+）型巨噬细胞；

3. 单核细胞：根据CD11B、CD43圈出单核细胞（CD11B⁺CD43⁺）；

4. 粒细胞：根据CD11B、CD43、CD62L圈出粒细胞（CD11B⁺CD43⁺CD62L^+/-SSC^hi），当粒细胞被激活时CD62L则低表达；

5. 淋巴细胞：利用TCRɣδ圈出ɣδT细胞，接着在TCRɣδ-的细胞中，进一步根据CD3划分 T 细胞（CD3+）和非T（CD3-）淋巴细胞；

（1）T细胞：在CD3⁺T细胞中，根据CD4、CD8圈出CD4+和CD8+ T细胞;在CD4+T细胞中圈出Treg细胞（CD25+）、Th1细胞（CCR1⁺CCR5⁺）和的Th2细胞（CCR4⁺CCR8⁺）；

在CD3⁺T细胞中，在根据CD44和CD62L圈出激活性T细胞（CD44⁺CD62L^-）、记忆T细胞（CD44^hiCD62L^lo）、naive T细胞（CD44^loCD62L^hi）；

（2）B细胞：非T细胞淋巴细胞中，根据CD45R圈出B细胞（CD3^-CD45R⁺）；

（3）NK细胞：非T细胞淋巴细胞中，根据CD49b圈出NK细胞（CD3^-CD49b^-）。

实验方案2

该方案以Sprague-Dawley大鼠的血液和肺、脾脏、肝脏、骨髓细胞为样本。

配色Pannel:

流式结果:

圈门分析:

1. 侧向散射(SSC)和前向散射(FSC)参数对样本细胞进行圈门,去除碎片(i)，利用死活染料去除死细胞(ii)，利用FSC-H和FSC-W参数来排除粘连细胞（iii），利用CD45圈出淋巴细胞（iv）；

2. T细胞：从CD45+细胞中，圈出CD3+T细胞（v)，根据CD4、CD8圈出CD4⁺T和CD8⁺ T细胞（vi）;

3. NK细胞；从CD45+CD3-的细胞中，圈出CD161⁺His48^-细胞（vii）；

4. B细胞：从CD45+CD3-CD161-His48+/-的细胞，圈出CD45R⁺CD161^-细胞（viii）；

5. 中性粒细胞：从CD45+CD3-CD161-CD45R-的细胞中，圈出CD43⁺细胞（ix）；

6. 单核细胞：从CD45+CD3-CD161-CD45R-CD43-/lo的细胞中，利用CD43和His48的差异表达圈出两个单核细胞亚群 ——CD43^LoHis48^Hi 和 CD43^HiHis48^Lo-Int（x）。

总结

两个方案为大鼠常见免疫细胞的鉴定分析提供了框架，但对一些细胞群的鉴定有所差异：方案1通过CD45+CD3-CD49B+鉴定NK细胞，方案2则通过CD45+CD3-CD163-鉴定NK细胞；方案1通过CD45+CD11B+CD43+鉴定单核细胞，而方案2通过CD43和His48将单核细胞分为两群（CD45⁺CD3^-CD161^-CD45R^-CD43^-/loCD43^LoHis48^Hi 、 CD45⁺CD3^-CD161^-CD45R^-CD43^-/loCD43^HiHis48^Lo-Int），强调了CD43和His48指标对中性粒和单核细胞鉴定中的实用性。

参考文献：

[1]Adusei KM, Ngo TB, Alfonso AL, Lokwani R, DeStefano S, Karkanitsa M, Spathies J, Goldman SM, Dearth CL, Sadtler KN. Development of a High-Color Flow Cytometry Panel for Immunologic Analysis of Tissue Injury and Reconstruction in a Rat Model. Cells Tissues Organs. 2023;212(1):84-95.

[2]Barnett-Vanes A, Sharrock A, Birrell MA, Rankin S. A Single 9-Colour Flow Cytometric Method to Characterise Major Leukocyte Populations in the Rat: Validation in a Model of LPS-Induced Pulmonary Inflammation. PLoS One. 2016 Jan 14;11(1):e0142520.