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ELISA检测样本的处理

作者:admin 信息来源:达科为 日期:20130830 打印 字体:  
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在收集标本前需有一个完整的计划,需要清楚要检测的成份是否足够稳定。ELISA检测提倡新鲜标本尽早检测,对收集后当天就进行检测的标本,及时储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,请取材后,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差,蛋白极易降解,直接影响实验质量,所以避免反复冻融。


◇ 液体类标本:

包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。


◇ 血清:

室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。


◇ 血浆:

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。


◇ 尿液:

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。


◇ 细胞培养上清:

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。


◇ 组织标本:

切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 

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