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嘿!PTM ! 我抓住你啦!

作者:admin信息来源:达科为日期:2019年05月22日打印字体:  
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*偷偷告诉你:文末有惊喜!!!

PTM全称Post-translationalmodification,即翻译后修饰,是蛋白质生物合成过程的较后步骤。PTM之于蛋白质,有点像PS之于照片,经过PTM的蛋白质会有不同的样子和功能。

今天给大家介绍一款很厉害的试剂盒,能够准确高效的提取并富集不同的PTM,方便您的后续研究~

蛋白质是生命活动的主要承担者,蛋白质层面的研究,最常被关注的就是蛋白表达量的改变。然而,蛋白表达量高低的调控形式过于单一,难以满足生物体如此复杂的运行要求。

那么如何解决这个问题呢?别急,大自然早就为蛋白质加好了buff~ 这个buff就是PTM, 蛋白质的翻译后修饰。

蛋白质的翻译后修饰(Proteinpost-translational modification, PTM)是一项重要的技能,是指在蛋白质的氨基酸侧链上共价结合化学小分子基团例如我们最了解的磷酸化修饰:

据估计,哺乳动物含有数百万种独特的蛋白质组但其却源于一个相对简单的基因组(约25000个基因),蛋白质组的复杂程度和蛋白质功能的多样性都要归功于PTM

目前已知的PTM的种类超过400种,几乎所有的蛋白质均可发生PTM。并且,同一个蛋白质还可同时具有多种PTM蛋白发生PTM后,会显著改变其理化性质和构象,从而直接改变蛋白的结合能力与功能。因此,即使蛋白本身的表达水平没有改变,但如果翻译后修饰的状态发生改变,蛋白的功能也会显著变化。

PTM这个超级buff的加持下,蛋白质的种类和功能都得到了指数级扩增。

下图以中间丝蛋白(IF)为例,描述了针对于IF的各种不同PTM对于其蛋白功能的影响:

尽管目前已知的PTM的种类超过400但只有少数几个被详细研究过,主要包括甲基化、磷酸化、乙酰化、泛素化和SUMO化,它们被证明是几乎所有细胞的关键调节因素,包括信号转导、表观遗传学、基因和蛋白质表达、蛋白质稳定性和定位以及细胞免疫。

目前主要研究的PTM及其作用和特点

PTM类别

已发表作用

新发现作用

目标氨基酸

修饰物

甲基化

表观调节

蛋白质互作,信号转导

R, K

甲基转移酶,

去甲基化酶

磷酸化

信号转导

蛋白质互作,表观调节

Y,  S, T

激酶,磷酸酶

乙酰化

表观和代谢调节

蛋白质稳定性、定位、合成

K

乙酰化酶,

去乙酰化酶

泛素化

蛋白酶体靶向-降解

蛋白质定位,蛋白质互作

K

泛素连接酶,    

去泛素化酶

SUMO

核蛋白定位,转录活性

蛋白质稳定性、应激反应、细胞周期

K

SAE,  ubc9, SENP

蛋白修饰及功能的多样性是维持机体复杂精准调控的基础,但同时也给研究PTM的科研人员的研究造成了很多的困扰。

为什么蛋白质翻译后修饰的鉴定难度要远远高于未发生修饰的蛋白质的鉴定,主要有以下几点原因:

  • 发生翻译后修饰的蛋白质样本量相对较少

  • 发生修饰时形成的共价键非常不稳定,且处于动态变化中 

  • 修饰与未修饰的蛋白及多种修饰形式的蛋白常混合存在 

针对这些困扰,Cytoskeleton公司开发了一系列名为 Signal-Seeker™ 的试剂盒,用于研究各种蛋白翻译后修饰。

Signal-Seeker™ 试剂盒使用亲和磁珠从任何给定的细胞或组织裂解液中提取并富集修饰蛋白,然后通过标准的Western blot程序分析浓缩蛋白群,最终用户使用自身的抗体检测所需的修饰蛋白。

Signal-Seeker™试剂盒检测流程如下图

Signal-Seeker™试剂盒的特点和优势

  • Signal-Seeker™试剂盒配套相应的抗体,能对任意蛋白的转录后修饰进行研究;

  • Signal-Seeker™试剂盒提供通用的裂解过滤系统及定量工具,能轻松从给定的细胞或组织裂解液中提取蛋白并进行总蛋白的定量; 

  • Signal-Seeker™亲和磁珠,富集效果无与伦比,配合对照磁珠,提供PTM蛋白精准定量;

  • Signal-Seeker™亲和磁珠可用于捕获PTM修饰的蛋白,然后用于进行进一步的分析(如Westernblot和质谱检测); 

  • 关键的去修饰化抑制剂,防止检测过程中的去修饰;

  • Signal-Seeker™kit可以用于研究多重PTM的串扰(例如目标蛋白的泛素化和乙酰化);

  • 市面上最全面的PTM试剂盒:包括通用裂解过滤系统、蛋白质定量工具、IP浓缩试剂、洗涤试剂、洗脱试剂、化学发光试剂。 

Signal-Seeker™试剂盒应用实例

Signal-Seeker™试剂盒研究Rac1蛋白的单泛素化多元泛素化

用MG-132预处理Swiss 3T3 细胞,然后添加/不添加CNF1 (cat# CN04)处理3h,用BK161 kit来进行 IP,裂解液上样量300 μg /次。

Lane 1: 3 μg 未处理的裂解液;

Lane 2: Ubiquitin亲和磁珠(cat# UBA01) +未处理的裂解液;

Lane 3: UBA01 + CN04处理的裂解液;

Lane 4: Ubiquitin 对照磁珠(cat# CUB02) +未处理的裂解液;

Lane 5: CUB02 + CN04处理的裂解液.

*注:用细菌毒素CNF1(cat#CN04)处理细胞会导致Rac1的组成性激活,并随后导致单泛素化和多泛素化。

可以看到,未经修饰的Rac1与泛素亲和珠和泛素对照珠(lane 2-5)发生非特异性相互作用;然而,单泛素化和多泛素化Rac1仅与泛素亲和珠(lane 3)结合,而与泛素对照珠(lane 5)不结合。所以建议用户在实验时使用适当的对照珠来帮助区分未修饰的目标蛋白带。


为了帮助大家更好的抓住PTM并且研究它们,现在Cytoskeleton公司对以下PTM研究相关产品进行促销:

即日起至2019.6.30

购买以下任意产品均可享受7折优惠

不要错过哦~

此次促销产品清单如下

Signal-Seeker™试剂盒

BK160

Signal-Seeker™ Phosphotyrosine  Enrichment Kit

KIT 30 assays

BK160-S

Signal-Seeker™  Phosphotyrosine Enrichment Kit

KIT 10 assays

BK161

Signal-Seeker™ Ubiquitin  Enrichment Kit

KIT 30 assays

BK161-S

Signal-Seeker™ Ubiquitin  Enrichment Kit

KIT 10 assays

BK162

Signal-Seeker™ SUMOylation  Enrichment Kit

KIT 30 assays

BK162-S

Signal-Seeker™ SUMOylation  Enrichment Kit

KIT 10 assays

BK163

Signal-Seeker™  Acetyl-Lysine Enrichment Kit

KIT 30  assays

BK163-S

Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine  Enrichment Kit

KIT 10 assays

BK165

Signal-Seeker™  SUMOylation-1 Enrichment Kit

KIT 30  assays

BK165-S

Signal-Seeker™ SUMOylation-1  Enrichment Kit

KIT 10 assays

乙酰化抗体

AAC01

Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal  Antibody (3C6.08.20)

2 x 100 µl

AAC01-S

Anti-Acetyl  Lysine Mouse Monoclonal Antibody (3C6.08.20)

1 x 25 µl

AAC02

Anti-Acetyl Lysine Mouse  Monoclonal Antibody  (7B5A1)   

2 x 100 µl

AAC02-S

Anti-Acetyl  Lysine Mouse Monoclonal Antibody  (7B5A1)   

1 x 25 ul

AAC03

Anti-Acetyl Lysine Mouse  Monoclonal Antibody (19C4B2.1)

2 x 100 µl

AAC03-S

Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody  (19C4B2.1)

1 x 25 ul

AAC03-HRP

Anti-Acetyl  Lysine Mouse Monoclonal Antibody HRP Conjugates

1 x 100 µl

AAC03-HRP-S

Anti-Acetyl Lysine Mouse  Monoclonal Antibody HRP Conjugates

1 x 25 ul

AAC04-beads

Anti-Acetyl Lysine Mouse  Monoclonal Antibody Agarose Conjugates

4 x 500 µl

AACX1

Chemically  Acetylated Bovine Serum Albumin (BSA)

1 x 500 µg

磷酸化抗体

APY03

Anti-Phosphotyrosine Mouse  Monoclonal Antibody

2 x 100 µl

APY03-Beads

Anti-Phosphotyrosine  Affinity Beads

4 x 300 µl

APY03-HRP

Anti-Phosphotyrosine-HRP  Mouse Monoclonal Antibody

1 x 100 µl

APY03-HRP-S

Anti-Phosphotyrosine-HRP  Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 25 µl

APY03-HRP-XL

Anti-Phosphotyrosine-HRP  Mouse Monoclonal Antibody

Large Quantities

APY03-S

Anti-Phosphotyrosine Mouse  Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 25 µl

SUMO化抗体

ASM01

Anti-SUMO-1 Mouse Monoclonal  Antibody

1 x 100 µl

ASM01-S

Anti-SUMO-1  Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 25 µl

ASM11-Beads

SUMOylation-1 Affinity Beads

3 x 400 µl

ASM23

Anti-SUMO-2/3 Mouse  Monoclonal Antibody

2 x 100 µl

ASM23-HRP-S

Anti-SUMO-2/3-HRP labeled  Mouse Monoclonal Antibody (Clone 12F3)

1 x 25 µl

ASM23-HRP

Anti-SUMO-2/3-HRP labeled  Mouse Monoclonal Antibody (Clone 12F3)

1 x 100 µl

ASM23-S

Anti-SUMO-2/3 Mouse  Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 25 µl

ASM24

Anti-SUMO-2/3 Mouse  Monoclonal Antibody

2 x 200 µl

ASM24-Beads

SUMO-2/3 Affinity Beads

2 x 400 µl

ASM24-S

Anti-SUMO-2/3 Mouse  Monoclonal Antibody (Trial Size)

1 x 150 µl

泛素化抗体

AUB01

Anti-Ubiquitin Mouse  Monoclonal Antibody

2 x 100 µl

AUB01-HRP

Anti-Ubiquitin-HRP  Antibody

1 x 100 µl

AUB01-HRP-S

Anti-Ubiquitin-HRP Antibody

1 x 25 µl

AUB01-S

Anti-Ubiquitin Mouse  Monoclonal Antibody (Trial size)

1 x 25 µl

AUB01-XL

Anti-Ubiquitin Mouse  Monoclonal Antibody

4 x 500 µl

其他相关试剂

BLR01

BlastR  Rapid Lysate Prep Kit

50  purifications

BLR02

BlastR Rapid Filtration Kit

50 purifications

CIG01-beads

Control for  Immunoprecipitation IgG beads

10 assays

CIG02-beads

Control for Acetylation  Immunoprecipitation IgG beads

10 assays

CIG03-beads

Control for  SUM01 Immunoprecipitation IgG beads

10 assays

CUB02-beads

Control for Ubiquitin  Affinity Beads

10 assays

UBA01-beads

Ubiquitin  Affinity Beads

40 rxs

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