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ELISPOT试剂盒选择三大要素,达优为您指路!

作者:admin信息来源:达科为日期:2019年05月21日打印字体:  
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随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用,体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。面对不同的实验我们怎样才能得到更好的实验数据?今天我们就和大家说说ELISPOT基本知识及试剂盒选择的几个要素

酶联免疫斑点检测(ELISPOT)是将细胞培养技术和ELISA技术相结合,可以原位地检测培养细胞体外分泌蛋白的高灵敏分析技术。该技术集高灵敏度、高可信度、高通量、单细胞水平、功能性检测与低成本等诸多优点于一身。根据研究目的及检测蛋白类型,可分为T细胞ELISPOT和B细胞ELISPOT两种类型。其中T细胞ELISPOT主要用于检测刺激后细胞所分泌的痕量细胞因子,而B细胞ELISPOT主要用于检测抗体分泌B细胞的频率。ELISPOT是用抗体或抗原捕获培养细胞分泌的蛋白,并以酶联斑点显色的方法将其表现出来。

本文结合达优®预包被ELISPOT试剂盒,将T细胞ELISPOT检测细胞因子的基本原理说明如下:

  • 特异性单抗包被在培养孔底部,通过非特异性蛋白溶液封闭多余空白位点;

  • 加入单个细胞悬液及刺激物培养,阳性细胞经活化分泌细胞因子,细胞因子就近被特异性包被抗体捕获;

  • 移出细胞,板底留下细胞因子的“影像”;

  • 加入酶标记的检测抗体,检测抗体和 “影像”上的细胞因子结合,形成“抗体-抗原-抗体”夹心结构;

  • 加入显色底物,在酶的催化分解下,生成不可溶的色素,沉淀在膜上,即形成斑点;斑点计数,结果分析。

ELISPOT试剂选择三大要素

  • 抗体对的特异性及亲和性

ELISPOT检测技术是通过两种高亲和力、高特异性的抗细胞因子单克隆抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法,对抗体对质量和纯度有着特殊的要求,因此势必要选择专业生产ELISPOT抗体对的公司。达优®系列预包被ELISPOT试剂盒根据不同检测因子,从其中挑选最佳组合抗体对进行生产。

不同来源抗体对检测效果对比图

  • 高效封闭系统的选择

不同的检测样本在板孔培养过程中,受各种实验条件影响,如果封闭不当都可能产生非特异性显色,导致非特异性斑点的产生或者背景颜色的加重。这将直接影响到最后结果的判断分析。达优®系列产品通过大量实验,对不同来源、不同配方封闭方法进行封闭效果的对比试验,筛选出更高效的封闭系统,并将之运用到系列试剂盒产品中。

不同来源、配方封闭方案筛选对比图    

  • 酶联信号放大系统的选择

为实现ELISPOT检测的高灵敏度,所用的信号放大系统——酶,要求纯度高,催化反应转化率高、专一性强、性质稳定,制成的酶标抗体也必须是性质稳定,且继续保留活性部分和高效催化能力。对国际上不同公司开发的最新通用性高效酶标抗体进行对比性筛选试验,一直作为达优®系 列产品质控及品质升级的一项重要工作持续进行,其首要目的就是保持试剂盒采用最佳的酶联信号放大系统,达到最佳检测效果。

不同来源酶联信号放大系统筛选效果对比图

看到了这里,想必大家对ELISPOT试剂盒选择有了一个初步的了解,是不是在默默的想小达君你不厚道呀,说了这么久,也不来点ELISPOT试剂盒看看·······

各位客官别急,小达君这就为你们奉上~~

达优® ELISPOT产品列表

达优® ELISPOT辅助试剂

达优® ELISPOT读板服务

达优® ELISPOT检测服务

其它说明

  • ELISPOT的检测服务为实验上门服务,需要到客户实验室进行实验,差旅费及食宿另行报价;

  • 上述实验操作所需试剂及耗材由实验室自行准备齐全,不在该服务报价中;

  • 检测方案及相关问题请具体咨询;

  • 报价具体费用明细最终详见服务合同。

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