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惊艳登场!临床级治疗性病毒载体生产必备转染试剂—PEIpro®-GMP

作者:admin信息来源:达科为日期:2019年05月08日打印字体:  
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2018年3月13日南京传奇生物科技有限公司的LCAR-B38M CAR-T自体回输制剂临床申请获批,成为中国首个获批的CAR-T疗法。随着新病毒载体系统的进一步开发,一些基于基因和细胞的疗法距离获得临床批准和遗传疾病治疗的商业化应用又更进了一步。使用正确的瞬时转染方法对病毒载体生产至关重要,以确保从工艺开发到高质量级别病毒载体生产的灵活性和可重复性。

法国Polyplus-transfection®提供一系列基于PEI的高品质转染试剂, 研发级PEIpro®可用于工艺开发过程中建立病毒载体生产体系,临床前级PEIpro®-HQ最高质量级别即完全GMP级别PEIpro®-GMP可用于临床病毒载体的生产,满足细胞治疗和基因治疗的质量要求。

PEIpro®-GMP是最高质量级别的PEI,是市场上唯一提供带有MPC连接器和焊接管的袋装转染试剂,非常适用于制造符合GMP标准的临床级治疗性病毒载体(如AAV和慢病毒)的封闭生产系统。使用PEIpro®或PEIpro®-HQ建立的大规模转染方案可确保与PEIpro®-GMP的无缝衔接,可用于制造治疗性病毒载体和后期临床试验的商业化。

表1.Polyplus-transfection®提供一系列不同级别PEIpro®,满足从工艺开发、临床前、到临床级别病毒载体的生产需求

图1. 使用不同级别PEIpro®,可重复获得相似的病毒滴度

将悬浮液HEK-293T细胞以1×10 cells/ mL的密度接种在FreeStyleTM F17培养基中,并按照相同方案,分别用PEIpro®,PEIpro®-HQ和PEIpro®-GMP试剂转染。用Helper Free Packaging System(Cell Biolabs)生产AAV,转染后72h,通过检测GFP报告基因表达来检测病毒滴度。

PEIpro®系列产品优势多多,一起来扒一扒~

  • 经优化的线性聚乙烯亚胺(PEI),毒性更低,转染效率更高

图2. PEI聚合物化学性质的优化

由于长片段的PEI对细胞有毒性,而短片段PEI结合DNA能力较差(见红色),所以优化PEI的片段大小,降低其分散性能减少细胞毒性,同时增加结合DNA的能力(见蓝色)和转染重复性。

  • 高滴度病毒生产的最佳选择

表2. PEIpro®是采用贴壁或悬浮细胞培养体系生产病毒的最佳选择

不管细胞培养体系和生产规模如何, PEIpro®和PEIpro®-HQ 均可获得较高的病毒产量,慢病毒的病毒滴度超过107IG/mL,而AAV的病毒滴度超过109 VG/mL。

  • 与其它PEIs相比,PEIpro®所需更少转染试剂和较少/相似的DNA用量

图3.与其它PEIs相比,PEIpro®所需更少转染试剂和较少/相似的DNA用量

悬浮HEK-293以1×106cells/mL的密度接种在无血清培养基中,使用重悬后浓度为1 mg/mL的PEIpro®、PEI “Max” 和L-PEI 25 kDa (Polysciences, Warrington, PA)进行转染。采用常规荧光素酶测定法在转染后48h测定荧光素酶的表达

  • 与磷酸钙相比能得到更高病毒滴度

图4.PEIpro®与磷酸钙相比能得到更高的病毒滴度

无血清培养体系培养HEK-293细胞,并产生慢病毒。每75 cm2烧瓶加入15 μg DNA和30 μl PEIpro®,转染48小时后,用流式细胞术检测上清中的病毒滴度。

  • 批次间有很好的稳定性和可重复性

5.使用不同批次PEIpro®生产蛋白的得率具有极佳的重复性

悬浮HEK-293细胞以1×106cells/mL 密度接种在无血清培养基中,按照PEIpro®标准操作流程进行转染。转染48h后采用 protein G亲和定量 (HPLC)法来检测IgG3-Fc的产量。

产品信息


Polyplus-transfection®,中文名保利嘉,是来自法国的一家专注核酸转染的生物技术公司。因为专注所以专业,其产品适用于体内和体外转染,包括DNAsiRNA及其他寡核苷酸、蛋白和多肽转染。高效率、低毒性、操作简便和高性价比的产品受到广大科研工作者喜爱,广泛应用于基因功能研究、蛋白生产、病毒包装和动物模型的构建。公司于2002年获得ISO 9001证书。



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