无血清ELISPOT技术

l 技术简介

荷兰U-CyTech公司是很早从事无血清ELISPOT检测技术研究并且取得卓越成果的公司之一。值得骄傲的是达科为公司也参与了U-CyTech的很大一部分研究工作，获得了联合的知识产权。达科为公司获得授权，于2006年开始在国内生产达优®无血清培养基。

由于涉及到专利的问题，这里只对无血清ELISPOT检测技术作一个简单的介绍。通俗地说，就是知道血清中维持淋巴细胞活力所必需的成分后（包括营养代谢成分、细胞信号成分和多种生长因子），把它们做成原料，添加到空白培养基中。然后需要反复验证这些添加成分，保证它们能够满足以下三个要求：

² 维持淋巴细胞存活，保持细胞活力和免疫功能状态；

² 不会额外刺激阴性细胞额外产生任何一种细胞因子；

² 不会抑制阳性细胞分泌各种细胞因子。

目前，我们同时提供U-CyTech原产的Lympho-Spot™无血清培养基和U-CyTech授权达科为在国内生产的达优®无血清培养基。它们的原料来源与质控标准完全相同，能获得同样出色的检测结果。由于物种的差异，部分添加成分在灵长类和啮齿类之间有差别。U-CyTech公司采取了同时添加的策略，所以生产出的是通用达优®无血清培养基；达科为公司采取的是分别添加的策略，所以生产出的是专用达优®无血清培养基，分灵长类和啮齿类两个品种。详细的差别见下表。

l 使用方法

达优®无血清培养基的目的在于为检测细胞提供一个不受血清干扰的培养环境。在细胞洗涤弃上清之后，用Lympho-Spot™无血清培养基重悬。之后做细胞计数，用Lympho-Spot™稀释到需要的浓度，加入ELISPOT孔中即可。此外，刺激物好也用Lympho-Spot™溶解和稀释。

l 无血清ELISPOT检测的实际效果

达科为公司做了一系列的有、无血清ELISPOT检测对比试验，并且在推广ELISPOT技术的标准化以及建立ELISPOT检测的质控系统时，都采用了无血清ELISPOT检测技术。在所有的实验中达优®都取得了优于血清的结果。总结起来就是：背景更干净，信噪比更高，频率更稳定，结果更真实。下图5.1是一些实际案例。