GFP融合蛋白免疫沉淀的新选择——GFP selector
还在用传统方法进行GFP融合蛋白免疫沉淀？那你就是Outman了，来看看IBA Lifesciences的GFP selector，给您提供GFP融合蛋白免疫沉淀的新选择！
传统的GFP融合蛋白免疫沉淀是基于与GFP特异性抗体非共价链接的protein A或protein G结合在固相，从而拉下蛋白的原理（见图1 A），其产率和效率通常受限于一抗的特异性和固相上protein A/G的结合能力。通常，在用SDS缓冲液洗脱时，抗体发生变性并与GFP融合蛋白及相互作用的配体一起从树脂上分离下来。因此，洗脱液中通常含大量一抗重链和轻链（见图1 B），妨碍鉴定蛋白的相互作用，还有可能影响下游实验，比如蛋白质印迹或质谱分析。
GFP selector是一种新颖的高品质树脂，用于高效、可重复的GFP融合蛋白免疫沉淀。GFP selector含单域抗体(single-domain antibody,sdAb)，可识别GFP及其衍生物，具有高特异性和pmol级亲和力。重要的是，GFP融合蛋白可以从GFP selector洗脱而不被抗体重链或轻链污染（见图1 C），因此可以轻易地鉴定与GFP融合蛋白特异性结合的蛋白。
△图1
GFP selector与传统GFP免疫沉淀的比较：
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传统免疫沉淀法使用与protein A偶联的GFP特异性抗体，结合GFP蛋白；
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传统法在洗脱时，抗体轻链和重链与抗原一起从树脂中洗脱；
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由于GFP特异单域抗体与固相的共价稳定连接，结合的GFP融合蛋白从GFP selector被洗脱时不会有抗体重链或轻链污染。
GFP selector也能结合更高容量的GFP融合蛋白（每μl树脂结合>4μg GFP，见图2 A）。与竞争产品比较，只有GFP selector能够结合含GFP的HeLa裂解物中所有靶蛋白（见图3），因此，它明显优于竞争产品和传统基于protein G的方法。
△图2
GFP selector具有高容量和高特异性：
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将GFP Selector和竞争产品与饱和的重组GFP蛋白孵育，通过SDS-PAGE和考马斯染色分析1μl树脂的容量；
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将相同体积的GFP selector和竞争产品分别与不含任何GFP标记蛋白的HeLa裂解物一起孵育，洗涤后，产物通过SDS-PAGE分离并进行银染色分析。
注：与竞争产品相比，GFP selector背景信号弱
△图3
GFP selector与竞争产品的免疫沉淀结果：
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将等量GFP Selector和竞争产品与1ml含GFP标记蛋白的HeLa裂解物一起孵育，通过考马斯染色和蛋白印迹分析上样、洗涤产物、洗脱产物。
产品优势：
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高特异性：识别GFP，mEGFP，sfGFP，Emerald GFP及最常见的CFP和YFP变体，不与mCherry，mRFP，dsRed，mTagBFP及其衍生物发生交叉反应；
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高容量：每μl树脂结合>4μg GFP；
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应用：推荐用于免疫沉淀、质谱。
此外，IBA还提供其他融合标签免疫沉淀试剂盒：
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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GFP Selector |
2-9131-002 |
200µl Slurry for 10 reactions |
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2-9131-005 |
500µl Slurry for 25 reactions |
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2-9131-020 |
2000µl Slurry for 100 reactions |
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GFP Selector Kit |
2-9132-008 |
1 Kit |
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RFP Selector |
2-9141-002 |
200µl Slurry for 10 reactions |
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2-9141-005 |
500µl Slurry for 25 reactions |
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2-9141-020 |
2000µl Slurry for 100 reactions |
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RFP Selector Kit |
2-9142-008 |
1 Kit |
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TagFP Selector |
2-9151-002 |
200µl Slurry for 10 reactions |
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2-9151-005 |
500µl Slurry for 25 reactions |
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2-9151-020 |
2000µl Slurry for 100 reactions |
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TagFP Selector Kit |
2-9152-008 |
1 Kit |
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MBP Selector |
2-9111-002 |
200µl Slurry for 10 reactions |
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2-9111-005 |
500µl Slurry for 25 reactions |
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2-9111-020 |
2000µl Slurry for 100 reactions |
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MBP Selector Kit |
2-9112-008 |
1 Kit |
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GST Selector |
2-9121-002 |
200µl Slurry for 10 reactions |
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2-9121-005 |
500µl Slurry for 25 reactions |
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2-9121-020 |
2000µl Slurry for 100 reactions |
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GST Selector Kit |
2-9122-008 |
1 Kit |
IBA lifesciences（德国）：IBA公司总部位于德国。二十年来，IBA以杰出的专利技术Strep-tag®系统为基础，发展出完整的产品组合，涵盖重组蛋白表达、纯化与固定以及特定细胞从全血或相关体液中分离的技术。同时，IBA也是全球领先的核酸合成专家，在DNA及RNA寡核苷酸的合成上已有超过二十年的经验，能根据客户的选择，生产含有特定染料或化学修饰的特殊寡核苷酸。
