单细胞水平如何进行基因表达分析？

基因表达 (gene expression) 是指细胞在生命过程中，把储存在DNA中的遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子（或RNA分子）。很多疾病的发生发展、很多药物的作用机理、很多生物的代谢调控作用等都和基因表达的变化有关，因此对基因表达进行分析十分重要。由于基因表达是在单个细胞水平进行调控，所以需要用多种方法来分析单个细胞如干细胞、神经元、发育组织、激光捕获切片的基因表达方式。

为了便于研究单细胞的基因表达，美国Signosis公司开发出一种基于SYBR Green的单细胞实时荧光定量RT-PCR检测试剂，该试剂可以使用细胞裂解液直接检测基因表达水平，无需RNA制备过程。

* SYBR Green是广泛用于双链DNA的特异性染料，常用作实时荧光定量PCR报告染料。

小编说了半天，下面正式Pick出今日介绍的主角：

与其他定量试剂盒相比，Signosis的试剂盒原理是什么？不同之处？优点是？

1）试剂盒包括cDNA合成和PCR扩增的所有试剂：

2）您只需要准备：目的基因特异性引物

3）不同之处在于：无需额外制备/提取细胞RNA

4）原理图：

图1 试剂盒原理：细胞裂解液裂解细胞后直接进行反转录及随后的 PCR分析。 

5）结果展示：

图2  A: 比较Signosis与其他品牌的细胞裂解液。分别对裂解产物中的β-actin进行30个循环反转录PCR。 

B: 基因组DNA污染检测。Lane1：细胞裂解产物不经过反转录直接对β-actin进行36个循环PCR扩增；Lane2：细胞裂解液反转录获得cDNA后对β-actin进行36个循环PCR扩增。 

图3 细胞裂解产物中检测靶基因。

随着HeLa细胞数的增加，分别用适量细胞裂解液裂解细胞后进行反转录，而后在7700 PCR仪上进行Actin、GAPDH和B2M基因的3复孔qPCR反应。 

6）产品优点：

7）FAQs：

a. 细胞裂解液能使用几次？

每个试剂盒里包含1mL的细胞裂解液：

b. 有没有仪器要求？

兼容SYBR Green的PCR仪。

更多信息请点击Signosis官网

www.signosisinc.com