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单细胞水平如何进行基因表达分析?

作者:admin 信息来源:达科为 日期:20190612 打印 字体:  
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炎炎夏日,今天给大家介绍一款用于单细胞水平基因表达分析的神器。


基因表达 (gene expression) 是指细胞在生命过程中,把储存在DNA中的遗传信息经过转录和翻译,转变成具有生物活性的蛋白质分子(或RNA分子)。很多疾病的发生发展、很多药物的作用机理、很多生物的代谢调控作用等都和基因表达的变化有关,因此对基因表达进行分析十分重要。由于基因表达是在单个细胞水平进行调控,所以需要用多种方法来分析单个细胞如干细胞、神经元、发育组织、激光捕获切片的基因表达方式。

为了便于研究单细胞的基因表达,美国Signosis公司开发出一种基于SYBR Green的单细胞实时荧光定量RT-PCR检测试剂,该试剂可以使用细胞裂解液直接检测基因表达水平,无需RNA制备过程。

* SYBR Green是广泛用于双链DNA的特异性染料,常用作实时荧光定量PCR报告染料。

 

小编说了半天,下面正式Pick出今日介绍的主角:


货号

产品名称

规格

目录价

品牌

CL-0003

单细胞实时荧光定量RT-PCR检测试剂

10次

¥5,449

Signosis

与其他定量试剂盒相比,Signosis的试剂盒原理是什么?不同之处?优点是?

1)试剂盒包括cDNA合成和PCR扩增的所有试剂:

☀ 细胞裂解液(1mL)

☀ Oligo dT

☀ 随机引物

☀ 反转录buffer预混液

☀ 反转录酶

☀ 对照引物

☀ SYBR Green PCR预混液


2)您只需要准备:目的基因特异性引物

3)不同之处在于:无需额外制备/提取细胞RNA


4)原理图:


图1 试剂盒原理:细胞裂解液裂解细胞后直接进行反转录及随后的 PCR分析。 

5)结果展示:


图2  A: 比较Signosis与其他品牌的细胞裂解液。分别对裂解产物中的β-actin进行30个循环反转录PCR。 


B: 基因组DNA污染检测。Lane1:细胞裂解产物不经过反转录直接对β-actin进行36个循环PCR扩增;Lane2:细胞裂解液反转录获得cDNA后对β-actin进行36个循环PCR扩增。 


图3 细胞裂解产物中检测靶基因。

随着HeLa细胞数的增加,分别用适量细胞裂解液裂解细胞后进行反转录,而后在7700 PCR仪上进行Actin、GAPDH和B2M基因的3复孔qPCR反应。 

 

6)产品优点:

✔ 一站式 — 试剂盒包含了从细胞裂解、反转录到PCR的所有试剂

✔ 无需RNA制备 — 细胞裂解产物可直接用于反转录

✔ 功能强大 — 该试剂可获得全长的cDNA

✔ 实时监控 — 整个分析过程可以实时监控

7)FAQs:

a. 细胞裂解液能使用几次?

每个试剂盒里包含1mL的细胞裂解液:

待裂解细胞数

细胞裂解液用量/次

使用次数

1000-10000

50ul

20次

50-1000

20ul

50次

1-50

5ul

200次

b. 有没有仪器要求?

兼容SYBR Green的PCR仪。


更多信息请点击Signosis官网

www.signosisinc.com



Signosis(美国):是一家专业的生物试剂产品供应商,致力于基于微孔板分析技术的生命科学研究产品的开发、生产和销售。Signosis成立于2007年,公司专注于细胞因子、转录因子、miRNA及疾病标志物等重要调控因子和标志物的研究,基于自有专利技术,开发完成400多种先进而独特的用于发现、筛选和分析的生命科学研究产品。

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