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Polyplus转染常见问题 — CRISPR

作者:admin 信息来源:达科为 日期:20171221 打印 字体:  
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1. 您推荐哪些产品用于CRISPR介导的基因编辑?

对于Cas9核酸酶蛋白和向导RNA复合物RNP(核糖核蛋白)的共转染,建议选择jetCRISPR™转染试剂。


如果使用转染质粒的方法,例如该质粒同时编码Cas9蛋白和向导RNA,则可以选择jetPRIME® 。的确,Dr. Weiss的团队和其他几个团队使用jetPRIME® 成功实现CRISPR/Cas9介导的基因敲除:


l Li, Y. & al. (2016) Exploiting the CRISPR/Cas9 PAM Constraint for Single-Nucleotide Resolution InterventionsPLoS One 11 e0144970

l Shi, J. & al. (2015). Cleavage of GSDMD by inflammatory caspases determines pyroptotic cell deathNature 526 660-5

l D’Osualdo, A. & al. (2015). Transcription Factor ATF4 Induces NLRP1 Inflammasome Expression during Endoplasmic Reticulum Stress. PLoS ONE 10 e0130635

l Moore, R., & al. (2015) CRISPR-based self-cleaving mechanism for controllable gene delivery in human cells. Nucleic Acids Res 43 1297-303


jetPRIME® 也同样适合质粒和向导RNA的共转染。


对于转染RNA的方法–mRNA编码的Cas9蛋白和向导RNA–我们推荐jetMESSENGER™ 转染试剂。



2. jetCRISPR™ 除能用于转染Cas9核酸酶蛋白和gRNA之外,能否用于供体质粒的转染?

jetCRISPR™ 是为了高效转染Cas9核酸酶和向导RNA核糖核蛋白复合物而开发的试剂。我们建议首先使用jetPRIME® 转染供体质粒,之后可以使用jetCRISPR™ 转染Cas9核酸酶和向导RNA的核糖核蛋白复合物(RNP),以获得最佳的基因编辑效率。


3. jetCRISPR™ 能否用于转染Cas9核酸酶以外的其他蛋白?

jetCRISPR™ 是为了高效转染Cas9核酸酶和向导RNA核糖核蛋白复合物而开发的试剂。我们推荐使用PULSin™ 转染其他蛋白。


4. 您推荐哪些产品用于体内CRISPR介导的基因编辑?

对于体内CRISPR介导的基因编辑,我们推荐选择 in vivo-jetPEI® 转染试剂。一些团队已经发表了,使用in vivo-jetPEI® 在小鼠体内进行基因编辑的结果:


l Zuckermann, M. & al. (2015). Somatic CRISPR/Cas9-mediated tumour suppressor disruption enables versatile brain tumour modellingNat Commun 6, 7391

l He, S. & al.  (2016) Annexin A2 Modulates ROS and Impacts Inflammatory Response via IL-17 Signaling in Polymicrobial Sepsis Mice. PLoS Pathog 12, e1005743

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