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微生物宏基因组文库构建必备——Fosmid library kit

作者:admin信息来源:达科为日期:2019年04月23日打印字体:  
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虽然微生物的培养技术已经发展了很多年,但是环境中可培养的微生物比例仍然较低,这就阻碍了对微生物多样性的研究和有益微生物资源的挖掘利用。利用宏基因组学对微生物的群落结构组成和微生物功能基因的挖掘,能极大地扩展微生物资源的利用空间。目前科学家们已利用土壤、海水、人唾液等环境样品成功构建了宏基因组文库,从而筛选到具有生物活性物质的各种酶类及一些次生代谢产物,包括脂酶/酯酶、蛋白酶、淀粉酶、氧化酶、几丁质酶、核酸酶、膜蛋白、4-羟基丁酸代谢酶系、生物素合成酶系、色素、抗菌抗肿瘤活性物质及抗生素抗性基因等。

宏基因组学(metagenomics是一种以环境样品中的微生物群体所有基因组作为研究对象,利用基因组学的研究策略,研究环境样品中所包含的全部微生物的遗传组成及其群落功能的研究微生物多样性的方法。在宏基因组研究中,稳定的大片段基因组文库是生物基因组学研究的基础材料平台。一般流程包括从环境样品中提取基因组DNA克隆DNA到合适的载体,导入宿主菌体,筛选目的转化子,进行高通量测序分析等工作。

在基因文库构建的过程中,尽量插入大片段DNA以获得完整的代谢途径多基因簇是很有必要的。目前多采用细菌人工染色体(BAC)、粘粒(Cosmid)载体、λ噬菌体克隆载体、Fosmid克隆载体。Fosmid载体由于其插入片段大小适中、易于构建、稳定性好、拷贝数可诱导等优点,越来越广泛地被应用于物理作图、基因挖掘、辅助测序等工作。

LGC(Lucigen)提供Fosmid文库构建试剂盒,该试剂盒中的Fosmid载体是行业金标准(原属于Epicentre产品),可完成各种生物样本编制完整和无偏向的Fosmid文库,利用自动诱导液保证单拷贝和诱导高拷贝数量的需要。

△Fig1. CopyControl™ Fosmid Library Production Kits实验流程图

技术优势

  • CopyControl™ pCC1FOSpCC2FOS载体已经过线性化、去磷酸化处理,可直接进行连接反应,可插入40 kbDNA片段;

  • 不需要限制性内切酶消化或脉冲凝胶电泳来准备用于克隆的基因组DNA

  • 使用pCC2FOS载体可以最大化高通量末端测序结果;

  • 可以诱导单拷贝到每个细胞50拷贝,安全地获得较高的DNA产量,同时保持了稳定克隆单拷贝数;

  • 高效率的lambda包装蛋白消除了假阳性背景。


△Fig2. CopyControl™ 载体图谱

另外,LGC(Lucigen)还提供Fosmid提取试剂盒、Lambda包装提取物、诱导液等配套产品。如果您对BAC文库感兴趣,也可以了解下LGC(Lucigen) 公司的CopyRight® v2.0 BACKit,该克隆试剂盒可插入200kb DNA片段,并且可诱导单拷贝至高拷贝,获得高产量的DNA

*产品详情请复制以下链接到浏览器查看:https://www.lucigen.com/CopyRight-v2.0-BAC-Cloning-Kits-pSMART-BAC-and-pEZ-BAC/

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LGCLucigen):Lucigen公司成立于1998年,提供各类用于分子生物学研究相关产品,可以使研究者成功克隆较难克隆的基因。2017Lucigen收购了Epicentre Technologies基因组试剂盒、酶和辅助试剂等产品线,2018年又被英国LGC公司收购,公司合并后改名为 Biosearch technologies,专注于基因组学研究。目前产品线主要包括:体外转录、基因克隆(BAC克隆试剂盒)、感受态细胞(TG1噬菌体文库构建感受态)、体外扩增、转座子突变、蛋白表达、核酸提取等。



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