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“Fc Blocking” 流式实验绕不过去的坎——TruStain FcX™ PLUS ™新品来袭

作者:admin信息来源:达科为日期:2019年03月12日打印字体:  
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Fc Blocking”可以不做吗?你是否经常在流式染色实验中听到这样的疑问?

今天小达君就要给大家介绍一下什么是Fc 受体封闭剂,为什么需要做Fc Blocking

在我们流式实验中,通常使用的抗体都是会有Fc段存在的,而细胞如果高表达Fc受体(比如巨噬细胞、B细胞或者肿瘤细胞等),那么在抗体染色的过程中,很有可能抗体Fc段会与细胞表面的Fc受体进行结合,从而产生非特异性的染色结果,最终导致流式实验结果假阳性/假阴性的存在。

因此,在流式实验过程中,除非检测细胞中Fc受体的表达,通常我们会使用纯化的抗体来进行Fc受体的封闭,如图:

那么,是否你还有这样的疑问,我用BSA做封闭可以吗?其实呢,BSA是牛血清白蛋白,可以理解为牛来源的Ab,存在Fc段,用BSA理论上也可以使细胞表面的FcR不再结合流式抗体的Fc段。但是,牛来源的抗体的Fc段不一定能和目的细胞(人源、鼠源等)表面的FcR结合,所以封闭作用是有限的。如图,没有使用封闭剂但使用了BSA跟使用封闭剂的染色结果差异会特别大:

(OCI-AML3细胞系用TruStainFcX(Cat#101319)封闭(红色TruStainFcX直方图)以及用5%BSA封闭(蓝色BSA直方图)后,染APC-CD11b(cat#101211,cloneM1/70)结果)

因此,Fc受体的封闭需要使用专门针对于目的细胞的抗体效果是比较好的。

现在,你知道为什么需要做Fc Blocking了吧?接下来,小达君要给大家简单介绍一下BioLegend最新推出的受体封闭剂TruStainFcX™ PLUSCat#156603)。它可有效防止抗体与小鼠细胞的非特异的结合。其克隆号(cloneS17011E)染色结果更优于之前的Fc受体封闭剂 TruStain FcX™Cat#101319))克隆号(Clone:93),并且从抗体的用量上来说大大减少,可节约实验成本。

(将小鼠脾脏细胞分别用TruStainFcX TM PLUS0.25μg/test,紫色填充直方图),TruStainFcX TM(克隆93,1μg/test,红线)封闭之后用CD90.2FITC染色,与未处理的小鼠脾脏细胞(黑线)作比较。结果显示TruStainFcXTM PLUS封闭效果更优。)

Description

Size

Cat. No.

TruStain FcX™ PLUS (anti-mouse CD16/32) Antibody

50 μg/500 μg

156603/156604

感兴趣的话,赶快来试试吧!!!

★更多Fc阻断试剂的信息:biolegend.com/flow_controls

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