您好,欢迎光临达科为生物城!
免费热线电话 : 400 819 7199 收藏达科为生物城

新品推荐

当前位置: 首页 > 新品推荐 > 正文

拿什么拯救您的细胞稳转实验?是时候展现真正的技术了

作者:admin信息来源:达科为日期:2019年02月28日打印字体:  
分享到:

一般来说,外源基因导入动物细胞可分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染导入的DNA仅能在动物细胞中维持数天,稳定转染导入的DNA能整合进动物细胞基因组中,随后细胞经过分裂增殖形成稳定表达转染基因的细胞系。在转染的基因表达质粒(或共转质粒)上添加选择标记,是筛选稳定转染细胞的最常用方法之一。

想要做好稳转,掌握下列几项妥妥的没问题~

一、选择稳转质粒

需要含有选择标记(例如抗生素抗性基因)的基因表达质粒,选择标记可以位于基因表达质粒上,或者位于共转染的单独的质粒上。阴性对照应使用不含选择标记的基因表达质粒转染细胞。 

二、稳转之前 

  • 确保使用的细胞系可以从分离的细胞中产生克隆,因为一些细胞需要互相接触才能生长;

  • 选择合适的筛选标记;

  • 选择适合您细胞类型的转染方法;

  • 通过建立剂量-反应曲线(杀伤曲线)确定细胞类型的筛选条件(Ausubel等,1995)。

三、杀伤曲线建立

最适浓度通过建立细胞杀伤曲线来确定。每种真核细胞系对不同抗生素的敏感度不同(某些细胞系能够完全抵抗某种抗当素),针对每种用于稳定转染的新细胞系或细胞株,杀死未转染细胞所需的最适浓度必须通过实验来确定。

(*应为每种细胞类型建立杀伤曲线,并且每次使用新批次的选择性抗生素)


遗传霉素(Geneticin, G418)是一种氨基糖甙抗生素,是稳定转染常用的筛选抗生素之一。哺乳动物细胞的筛选浓度根据细胞类型等多种因素而变化,以InvivoGen的G418为例(不同厂家不同批次产品溶解度各有差异,仅供参考)。在开始实验前,建议通过测试几种浓度(100 μg/ ml至1 mg / ml)来确定杀死宿主细胞系所需的最佳抗生素浓度。

InvivoGen建议的工作浓度:G418通常以400 μg/ ml的浓度使用。当然仍需要为您的细胞确定最佳浓度。下面列出了常见哺乳动物细胞使用G418筛选的浓度(参见下表)。

好不容易get到了实验技巧,奈何无机会试手?

小达君在开学/开工之际为大家准备了InvivoGen的筛选抗生素G418免费试用装

G418试用免费拿,还等什么?!

试用装规格:1ml G418溶液 (浓度:100mg/ml)

关注达科为公众号,回复【G418】0元拿走

*每个课题组仅限申请一次

活动时间:即日起,发完即止(数量有限~)

InvivoGen G418产品特点

产品浓度:100 mg/ml in HEPES buffer

CAS number:108321-42-2

质控:每批产品都经过全面测试,以确保不存在批次差异

纯度:≥90%(HPLC)

内毒素水平:<0.5 EU / mg

细胞测试:在G418敏感和G418抗性哺乳动物细胞系中验证产品效果

产品信息

G418溶液

规格

货号

目录价

品牌

G418 (Geneticin)

1 g (10 x 1ml)

ant-gn-1

¥1,204

InvivoGen

5 g (1 x 50 ml)

ant-gn-5

¥3,169


InvivoGen 1977年成立于法国,是法国最早的生物科技公司。公司成立的初期阶段主要提供细胞培养相关试剂,如抗支原体、细菌、真菌污染的抗生素以及基因筛选抗生素(Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B, G418, Zeocin)。随着天然免疫研究热点的兴起,InvivoGen于2000年开始致力于天然免疫相关产品的研发和生产,并成为全世界最优质、最专业的天然免疫相关产品生产商。InvivoGen为天然免疫研究提供一整套研究方案,包括不断更新的模式识别受体(PRRs)激动剂和拮抗剂,PRRs报告基因细胞以及天然免疫信号通路的诱导剂和抑制剂等。


微博名称:达科为生物城
微博地址:
http://e.weibo.com/bjdakewe

微信二维码:
达科为生物技术集团  京ICP备13014125号-1
全国免费热线:400 819 7199 Email:bj_info@dakewe.net
联系我们
© Copyright 2013 Hewlett-Packard Development Company, L.P. All Rights