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ELISPOT Part 6----PVDF板的乙醇活化

作者:admin信息来源:达科为日期:2018年09月12日打印字体:  
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ELISpot底板材质的改进

自1983年ELISPOT技术创立之初,检测底板使用的是普通塑料板,但由于塑料板的蛋白吸附能力差,实验的灵敏度有限,因此也限制了ELISpot技术的发展。1985年,Moller SABorrebaeck CA硝酸纤维素膜作为底板,引入ELISPOT中用于检测分泌抗体的阳性B细胞,获得了远优于塑料板的结果。

不过硝酸纤维素(包括醋酸纤维素)也有自身的不足。由于它是天然纤维素经过人工酯化后获得的,纤维排列不规则,膜表面平整度差,导致表面形成的斑点外形破碎,高低错落,并且边缘弥散。另外,纤维素还存在机械承受力差,化学稳定性差,不利于长时间保存等缺点。

1995年,荷兰Utrecht大学免疫研究所的Schielen P团队把一种更优于硝酸纤维素膜的PVDF膜引入了ELISPOT检测中。PVDF是完全人工合成的,可以控制其纤维的长度与排列方式,从而获得几乎完美的膜结构。相比硝酸纤维素膜,PVDF膜具有更优的蛋白吸附性质,更加均匀的膜结构以及更加精细的显色条带分辨率。因此,PVDF的引入是继硝酸纤维素膜之后,ELISPOT底板材料的又一次重大突破。至今,除了BD公司还在沿用硝酸纤维素膜板外,其余全球所有的ELISpot试剂公司都用PVDF膜取代了硝酸纤维素膜。

 

PVDF膜的乙醇活化

由于PVDF膜是疏水性的,因此在使用前须用乙醇润湿后才能使用。酒精活化的PVDF膜板可以显著强化斑点的清晰度和可读性,增加斑点数量,提高ELISPot检测的灵敏度

 

乙醇活化PVDF膜的快速指南

乙醇活化—乙醇的浓度和加入的时间是关键

MSIP和IPFL板:每孔加入15 µl 35%的乙醇溶液,润湿时间不超过1 min;

MAIPSWU板:每孔加入50 µl 70%的乙醇溶液,润湿时间不超过2 min;

板子的清洗:每孔加入200 µl的无菌水进行清洗,重复5次。

加入包被抗体:每孔加入100 µl PBS稀释好的包被抗体,4℃包被过夜。

 

乙醇活化PVDF膜的注意事项:

未润湿的PVDF膜洁白不透明的;经乙醇润湿后,颜色变暗,呈半透明状,很容易观察二者的区别。

加乙醇时,枪头应该靠在孔壁接近孔底的地方,注意枪头不要刺到PVDF膜。

 若加入的乙醇挂在孔壁上,盖上板盖,轻轻叩击,让乙醇顺势滑落。乙醇一旦接触到PVDF膜,就会在表面张力和毛细作用下迅速浸润整块膜,使得膜的颜色和透明度发生变化。

乙醇加入的体积是经过优化的,请勿随意加大或减少用量。

膜在润湿后避免过长时间的孵育,因为酒精的挥发会导致膜的高疏水性

预湿后的乙醇必须被有效的清洗掉,因为残留的乙醇会干扰斑点的形成。

 


为方便中国客户的学习,Mabtech厂家专门在优酷上传了《酶联免疫斑点技术(ELISpot),PVDF板的乙醇活化》的操作视频,小伙伴们可以更清晰的学习到PVDF膜的活化操作哟!


观看视频请点击链接

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