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体验Strep-Tactin® XT 蛋白纯化产品,更有暖心好礼相送哦!

作者:admin信息来源:达科为日期:2018年05月15日打印字体:  
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还记得小编之前给大家介绍Strep-tag® 系统的发展由来吗?IBA新推出的第三代Strep-tag®系统,以其极高的亲和力、极高的蛋白纯度、极简的操作步骤等优势,越来越受到广大科研伙伴们的青睐!

为了让大家更好的体验该纯化体系,小编准备了暖心套装小礼品哦~

好礼相送

即日起至6月15日,凡购买Strep-Tactin®XT系列纯化/蛋白固定产品,即可免费获得以下小礼物(二选一):


基本Buffer组(2-9997-001),内含

蛋白检测组(2-9997-002),内含

1x Buffer W, 120 ml

Strep-Tactin®-HRP conjugate, 20 μg

1x Buffer BXT, 25 ml

Control protein GFP-Strep-tag, 30 μg

纯化步骤更精简 

Strep-tag® 系统纯化流程精简,省去测试不同条件的时间

在所有缓冲液都已准备好的情况下,His-tag 与 Strep-tag® 系统皆为一步纯化。但不同于 Strep-tag® 的是,使用 His-tag 系统时,常需先对纯化不同目的蛋白所需的咪唑 (Imidazole) 溶液浓度及含盐量进行测试。下表为两个系统的标准纯化步骤:


纯化流程

第三代 Strep-tag® 系统

His-tag 系统

平衡柱子

2 CV Buffer W
成分
100 mM Tris/HCl pH8.0;
150 mM NaCl;
1 mM EDTA;

2 CV Ni-NTA Lysis Buffer
成分
50 mM NaH2PO4
300 mM NaCl;
10 mM imidazole,依结合状态调整;
Adjust pH to 8.0;

加入蛋白提取液

在上样前,为移除可能产生的沉淀物,冻存的细胞提取液需先离心一次(18000 xg,5 min,4°C)

冲洗纯化柱

5x 1 CV Buffer W

2x 4 CV Ni-NTA Wash Buffer
成分
50 mM NaH2PO4
300 mM NaCl;
20 mM imidazole;
Adjust pH to 8.0;

洗脱蛋白

6 x 0.5 CV Buffer BXT
成分
Buffer W;
100 mM biotin;

4 x 0.5 CV Ni-NTA Elution Buffer
成分
50 mM NaH2PO4
300 mM NaCl;
250 mM imidazole;
Adjust pH to 8.0;

再生/保存柱子

4 CV 10 mM NaOH
8 CV Buffer W

0.5 M NaOH for 30 mins
30% EtOH

* His-tag系统:参考生产商batch纯化流程

另外值得一提的是,Strep-tag® 系统能与许多表面活性剂、还原剂和螯合剂兼容,是一个非常有弹性的系统。若目的蛋白为金属蛋白或膜蛋白,也可以将缓冲液中的EDTA去除,并且不会影响 Strep-Tactin®XT的效果。具体兼容试剂可见下表。

试剂

耐受浓度(测量值,不代表最高值)

DTT

45 mM

β-Mercaptoetanol

45 mM

EDTA

50 mM

Imidazole

250 mM

NaCl

4.5 M

Urea

6 M

更详细的相关试剂表请看,底部阅读原文。

  纯化结果一较高低  

由上表可知,Strep-tag® 系统的纯化流程简便,但纯化效果不打折扣。下图测试了几种不同的蛋白在天然状态下的纯化,纯度皆在95%以上。除此之外,在变性条件中纯化目的蛋白亦没问题,纯度仍远高于使用His-tag系统。

在native条件下,纯化mCherry及GAPDH蛋白的结果

 His-tag 系统(左)与第三代 Strep-tag® 系统(右)

以SDS-PAGE分析发现,不管是mCherry或是GAPDH,使用Strep-tactin® XT: Twin-Strep-tag®都能得到纯度较高的目标蛋白(见Elution)。Western Blot分析结果显示,提取mCherry所出现的杂质为其降解产物。

  在变性条件下,纯化不同蛋白的结果  


以SDS-PAGE分析发现,使用第三代Strep-tactin®XT能在使用6M尿素的变性条件下,得到大量高纯度的蛋白;使用Strep-tactin®(4M尿素)得到蛋白量较少。而使用Ni-NTA虽然能在将pH值调降至4.5(E2)情况下,纯化出靶蛋白,但得到的最终产物仍含有许多杂质。

  适用范围广  

蛋白类型

因His-tag系统使用Ni离子,所以在纯化金属蛋白(多数为酶)时,可能会受到金属间交互作用的干扰。而使用Strep-tag® 则不会出现此问题,因为Strep-Tactin® XT与Strep-tag®的特异性结合不受金属离子影响。且因其温和的纯化流程,所以还能用于纯化大型蛋白、多亚基的蛋白复合体或是跨膜蛋白,并且保持蛋白功能。以Strep-tag®系统纯化出不同的蛋白实例如下:

宿主细胞类型

依据研究项目的不同,各实验室使用不同的表达系统,常用的有大肠杆菌、哺乳动物细胞、酵母、昆虫细胞或是植物细胞等。如果使用哺乳动物细胞来表达目的蛋白,His-tag就不适合,因为系统中的组氨酸会干扰其纯化效果。而Strep-tag®系统则与这些表达系统都能互相搭配。请见下图实验数据:

* 单一条带为纯化出来的目标蛋白

除了用来生产高纯度的蛋白,Strep-Tactin® XT与Twin-Strep-tag®间的高亲和力更能用来稳定的固定目标蛋白,以进行蛋白质检测,例如SPR分析。以往为了增进目标蛋白的纯度,或进行下游分析,常常研究一个蛋白需要使用好几个不同的标签。现在有了 Strep-tag®这个多功能的亲和标签系统,让您的蛋白研究从克隆到分析一步到位。

Strep-Tactin® XT 系列产品

名称 货号 规格 网站报价
Strep-Tactin® XT Superflow® 50 % suspension 2-4010-002; 4 ml; ¥1365;
2-4010-010; 20 ml; ¥4814;
2-4010-025 50 ml ¥11,437
Strep-Tactin® XT Superflow® gravity flow columns 2-4011-005; 5×0.2 ml; ¥2361;
2-4012-001; 1 ml; ¥1012;
2-4013-001; 5 ml; ¥3051;
2-4014-001 10 ml ¥5,734
Strep-Tactin® XT Superflow® cartridges (for Äkta/peristaltic pumps) 2-4021-001; 1 ml; ¥1181;
2-4022-001 5 ml ¥3,051
Strep-Tactin® XT Superflow® high capacity 50 % suspension 2-4030-002; 4 ml; ¥1824;
2-4030-010; 20 ml; ¥6562;
2-4030-025 50 ml ¥15,178
Strep-Tactin® XT Superflow® high capacity gravity flow columns 2-4031-005; 5×0.2 ml; ¥3051;
2-4032-001; 1 ml; ¥1365;
2-4033-001; 5 ml; ¥4186;
2-4034-001 10 ml ¥7,880
Strep-Tactin® XT Superflow® high capacity cartridges (for Äkta/peristaltic pumps) 2-4025-001; 1 ml; ¥1518;
2-4026-001 5 ml ¥4,431
MagStrep "type3" XT beads 5% suspension 2-4090-002 2 ml ¥2,724
Strep-Tactin® XT Spin Column Kit 2-4151-000 1 kit ¥2,300
Strep-Tactin® XT immobilization plate 2-4101-001 1 plate ¥796
Twin-Strep-tag® Capture Kit 2-4370-000 1 kit 请咨询

  IBA品牌介绍  

IBA lifesciences(德国):IBA公司总部位于德国。二十年来,IBA以杰出的专利技术Strep-tag®系统为基础,发展出完整的产品组合,涵盖重组蛋白表达丶纯化与固定以及特定细胞从全血或相关体液中分离的技术。同时,IBA也是全球领先的核酸合成专家,在DNA及RNA寡核苷酸的合成上已有超过二十年的经验,能根据客户的选择,生产含有特定染料或化学修饰的特殊寡核苷酸。

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