新产品jetCRISPR™——用于基因编辑的RNP转染试剂

CRISPR/Cas9核酸酶系统，是一个强大且高特异性的基因编辑工具。CRISPR/Cas9是一个双组分系统，由gRNA引导Cas9核酸酶到基因组的特异性靶向序列，从而进行基因编辑，如突变、插入或删除。

jetCRISPR™是一种全新的专门为CRISPR/Cas9设计的RNP转染试剂，可带来更高的CRISPR基因编辑效率，同时保持极佳的细胞活性和状态。快来试试优异的CRISPR/Cas9 RNP转染试剂吧！

jetCRISPR™专为高效转染RNP(gRNA和Cas9蛋白复合物)而开发，可在多种类型细胞中进行多靶点的高效Cas9基因编辑。(图1和图2)

图1: 使用jetCRISPR™，在HeLa细胞中进行高效基因编辑。

在96孔板中进行HeLa细胞RNP转染，每孔0.3 µl的jetCRISPR™试剂和几种浓度的Cas9蛋白和HPRT1 SgRNA或阴性对照。转染48h后，T7消化产物经2%琼脂糖凝胶电泳分析并用BET染色，用G:Box紫外成像仪(Syngene^®)进行成像。图像经Genesnap软件(Syngene^®)采集，INDEL%使用Genetools软件(Syngene^®)确定。

1: 完整的1083bp片段, 2: 827bp长片段, 3:  256bp短片段.

图2: jetCRISPR™基因编辑效率优于同类型产品

在96孔板培养的A549和HEK-293细胞中转染RNP，每孔0.3 µl的jetCRISPR™或Lipofectamine® CRISPRMAX™，30 nM RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)。转染48h后，采用T7核酸内切酶方法计算INDEL%，评估基因编辑效率，INDEL%使用Genetools软件(Syngene^®)确定。

Polyplus的转染试剂对细胞极其柔和，细胞因此能在整个转染过程中保持极佳的活性和状态。jetCRISPR™兼容血清和抗生素，因此RNP转染可在利于细胞活性的优化培养条件下进行。 

图3: jetCRISPR™转染48h后，极佳的细胞活性和状态

在96孔板中用30nm RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)和0.3 µl的jetCRISPR™转染HEK-293和A549细胞，转染48h后，使用phase contrast ZOE Fluorescent Cell Imager (BIORAD^®)观察细胞状态。 

转染Cas9蛋白比转染质粒， 可以更快的进行基因编辑。使用jetCRISPR™转染Cas9蛋白和gRNA可进行快速可靠的基因编辑(图4)。此外，Cas9蛋白可以比质粒更快从细胞中被清除，从而减少了脱靶效应，可以更特异的进行基因编辑 (Kim S, et al; Genome Research 2014; 24:1012–1019)。

图4: 在HEK-293细胞中，使用jetCRISPR™进行快速可靠的基因编辑

在HEK-293细胞中进行RNP转染，96孔板每孔30nM RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)和0.3 µl的jetCRISPR™或0.3 µl的Lipofectamine^® CRISPRMAX™。转染48h后，采用T7核酸内切酶方法计算INDEL%，评估基因编辑效率，INDEL%使用Genetools软件(Syngene^®)确定。

jetCRISPR™为即用型溶液。RNP转染过程简便：RNP复合体形成、加入转染试剂、再加到孔中。jetCRISPR™适用于正向转染和反向转染，因此可以很方便的根据细胞调整实验操作，以获得合适效果。使用反向转染操作比正向转染提前一天获得实验结果(图5)。

图5: jetCRISPR™正向转染和反向转染操作步骤

gRNA和Cas9成功进入目标细胞，是高效基因编辑必不可少的部分。然而，使用无DNA的方案，即Cas9以蛋白/gRNA复合物方式导入细胞，更有吸引力。因为它克服了DNA入核的主要屏障，同时避免不必要的DNA整合。此外，导入Cas9蛋白更容易调控Cas9的表达，从而减少了Cas9核酸酶的脱靶活性。这是为什么科学家们需要可靠的转染试剂，来实现这个应用。

我们为CRISPR实验提供了全套解决方案 (表1和图6):

▬jetCRISPR™转染RNP –蛋白和gRNA共转染

▬jePRIME^®用于CRISPR DNA质粒方案

▬jetMESSENGER™用于RNA转染(gRNA和mRNA共转染)

▬in vivo-jetPEI^®用于DNA活体转染(Zuckermann et al. (2015) Nat Commun6, 7391; He et al. (2016) PLoSPathog 12. E1005743)

表1:专为CRISPR实验设计的转染试剂

图6：为CRISPR实验设计的体外转染试剂

Polyplus-transfection^®，中文名保利嘉，是来自法国的一家专注核酸转染的生物技术公司。因为专注所以专业，其产品适用于体内和体外转染，包括DNA、siRNA及其他寡核苷酸、蛋白和多肽转染。高效率、低毒性、操作简便和高性价比的产品受到广大科研工作者喜爱，广泛应用于基因功能研究、蛋白生产、病毒包装和动物模型的构建。公司于2002年获得ISO9001证书。