NanoTag Biotechnologies,2015年在哥廷根成立,专注于生产生化和荧光应用的单域抗体(纳米抗体/VHH抗体)和试剂。可稳定提供荧光标记的单域抗体,新型标签“ALFA”单域抗体及其纯化系统,用于IP的Selector resins,以满足各种实验的要求。纳米抗体特别适用于高分辨率显微镜成像。
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1、FluoTag —— 带荧光标签的单域抗体,每个单域抗体可偶联1个,2个或4个荧光标签,用于高分辨率显微镜成像。
COS 细胞线粒体表达标记物Tom70-mNeonGreen。使用FluoTag-X2 anti-mNeonGreen AbberiorSTAR RED (紫)对细胞进行染色,细胞核用 DAPI(蓝)染色。
2、新型标签 —— ALFA系统
ALFA 标签是一种新型、合理设计的表位标签 (SRLEEELRRRLTE),它形成一个小而稳定的α-螺旋,无论其在原核和真核宿主中的靶蛋白上的位置如何,该螺旋都具有功能。侧翼脯氨酸残基不是识别序列的一部分,但可能有助于标签与目标蛋白质的空间分离。
2.1 用于成像的ALFA系统:
Nanotag开发了一种以 ~26 pM 亲和力结合 ALFA 标签的单域抗体,它不仅非常适合超分辨率显微镜、免疫沉淀和蛋白质印迹,而且还可以检测活细胞内的蛋白质。这种纳米抗体几乎可以与所有种类的荧光团、酶或其他生物分子结合。
2.2 用于免疫沉淀的ALFA系统:
ALFA Selector ST:可在酸性或变性条件下洗脱,为高效下拉ALFA标记的目标蛋白而设计。
ALFA Selector PE:针对胜利条件下的洗脱进行优化。
将在 PBS 中制备的 HeLa 裂解物与重组纯化的 ALFA 标记的 GFP 底物(右泳道)混合。裂解物/底物混合物与 ALFA SelectorPE(左图)或 ALFA SelectorST(右图)一起孵育。用 PBS 洗涤后,结合的蛋白质用 200 µM ALFA 肽、甘氨酸 pH2.2 或 SDS 样品缓冲液 (SDS) 洗脱。使用 ALFA SelectorPE 时,天然条件下的肽洗脱是有效的。通过用甘氨酸或 SDS 样品缓冲液洗脱,可以从两种 ALFA Selector 树脂中回收目标蛋白。
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