2016年达科为生物第四届流式培训班——南京分站 理论课程Live

 2016年1月7日，2016年达科为生物第四届流式培训班—南京分站在南京医科大学先知楼正式拉开帷幕。课程分为理论课与上机实验，1月7日到8日是理论课程，1月9日到10日是流式上机实验。

  1月7日上午，理论培训8点半准时开始，由上海达科为公司总经理薛金奎做开场发言， 16年的首场流式培训班选在南京医科大学举办，大家的反响热烈，给16年开了个好头。并向各位学员介绍了达科为公司，以“引进新产品、新技术”为己任，以“实验之友，服务质优”为服务宗旨，致力于为大家提供优质的产品与服务。

    首先做报告是来自南京大学医学院侯亚义教授，高度评价我们达科为公司在流式实验技术领域的贡献，并分享了侯教授课题组在系统性红斑狼疮方面的研究。红斑狼疮（SLE）在人群中的发生率女性大大高于男性，15-45岁多见。与SLE和APC-T cell信号传导有关，涉及到几乎所有免疫细胞，关键的信号通路是TLR7，在TLR7配体的刺激下，小鼠发生类SLE样病变。SLE患者IFN-alpha增高，提示和pDC相关。TLR8和TLR9经TLR7介导自身免疫疾病，TLR8和TLR9双敲除鼠的脾脏增大，B细胞流式指标CD21，CD23，CD5和B220都有降低。SLE严重的病人中几乎找不到B细胞，并产生大量自身抗体、IgG增加以及IL-6等细胞因子分泌发生变化。DC的CD80，CD86和MHC发生变化，记忆性T、CD4和CD8 T cell增加。候教授还阐述了对SLE病因的观点，不合适的炎症反应，引起免疫细胞的混乱而导致后期的免疫系统的不协调。

接下来是达科为仪器部梁锴技术讲解了细胞的精确计数，AO/PI双荧光的原理和应用。

    第三场报告由南京医科大学免疫学系王晓明教授与大家分享了发生中心的免疫应答和肠道上皮间淋巴细胞（IEL)的研究进展。讲解了流式的应用，包括：表型分析、增殖、凋亡、抗原递呈、磷酸化蛋白、以及细胞动态分布，还对Gpr18调控小肠上皮间淋巴动态平衡的课题思路进行了深入的阐述。Gpr18在T、B淋巴细胞和IEL中高表达。Gpr18的敲除使得IEL在肠道上皮和固有细胞层中的穿梭平衡被打破，细胞迁移收到抑制，而影响免疫细胞的成熟。

1月7日下午，首先是江苏省人民医院血液科吴雨洁副研究员讲解了大量流式细胞技术在血液病诊断中的应用案例，尤其在淋巴细胞分群、白血病和淋巴瘤分型、微量残留病灶的监测中起到重要作用。以及TCRVbeta共有24种抗体，流式检测对微小残留病灶的诊断有重要意义（需求量很大）。

    接着是中国科学院巴斯德所张晓明研究员讲解了复杂流式技术在肿瘤免疫中的应用。目前科学界有基因组、蛋白组、转录组、表观组、代谢组等概念，张教授提出细胞组学的概念，提出使用5-10ml的血液，既可以确定人的免疫状态。用4-5个panel的组合，检测70-80个指标，对疾病进行相关研究。张教授可以做到18色流式检测，还分享了宫颈癌与Treg，乳腺癌和肿瘤浸润细胞及预后研究中的重要作用。

茶歇过后由南京医科大学一附院肝移植中心吕凌教授为大家作报告。吕教授刚刚做完一台手术，就赶来给大家分享他在Treg研究中的心得。吕教授研究Treg用于移植排斥，介绍了Treg的众多marker，包括FoxP3，Helios，Nrp1，CTLA-4，CD45RA，CD39，PD-1/PDL-1等。讲解了Treg的抑制免疫、介导细胞凋亡、调节DC的抗原递呈的功能。乙酰化、泛素化、microRNA对Treg的调节。肝脏移植排斥多为慢性排斥，对符合条件的肝移植病人，吕教授在体外成功诱导Treg后回输病人，经多次回输（7个月时间），逐步减去免疫抑制剂的使用，成功使得肝移植摆脱免疫抑制剂的使用。

    1月8日上午九点，第二天的理论课程开始了。首先是达科为生物工程中心周翔经理作报告。周翔经理讲述了ELISPOT的原理、刺激剂的选择、斑点结果判定以及ELISPOT的应用等。

接着是接着是南京医科大学病原生物学系陈晓军博士讲解了DC不同亚群流式技术的分析， MΦ的染色及包括MΦ中M1、M2的分型，以及B细胞染色。其中主要讲解了Th1、Th17和Treg刺激阻断剂的细节，包括选择使用的刺激物、阻断剂、阻断时间等，其中尤其提到BioLegend抗体质量非常好，还总结了2015年发表的免疫学相关文章。

    接下来由达科为免疫组技术王婷婷为大家讲解了流式细胞术的工作原理和多色配色方案的解决，也讲述了同型对照的选择及仪器的设置和调节等。

    1月8日下午14点开始培训，首先是中科院生化细胞所刘小龙教授课题组陈旭峰博士作报告，陈博士讲解了多色流式细胞术的原理、技术特点以及其优缺点，并结合自己的实际案例给大家展示多色流式细胞术实际应用中的基本流程。同时，陈博士还给大家介绍多色流式细胞术在造血干细胞的分析纯化、磷酸化研究、周期凋亡研究以及移植等多个方面的实际应用。最后，向大家阐述多色细胞术的一些注意事项。

 紧接着是上海市免疫学研究所沈蕾研究员阐述了当处于肥胖时，细胞缺氧引起死亡而产生慢性炎症，并阐述了T、B细胞对肥胖引起的炎症的调控，以及T细胞对巨噬细胞的影响进而影响胰岛素分泌的变化和B细胞对糖代谢的影响。

  最后由达科为免疫组技术程华与大家分享了流式细胞术的应用，如胞内因子检测，细胞凋亡，细胞周期等技术内容。

两天充实而精彩的理论课程已圆满结束，通过专家教授们的讲解和分享，学员们表示收获颇丰。接下来的9号到10号是为期两天的流式上机操作，尽请期待。